通过SDS-PAGE测定分子量在蛋白质研究中主要用于确定蛋白质及多肽的分子量。该技术依赖于蛋白质在电场中基于分子大小的不同进行分离，从而推断其分子质量。

一、SDS-PAGE的基本原理

SDS-PAGE，全称为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，是一种将蛋白质样品在电场中按照分子大小进行分离的实验方法。其核心原理在于使用SDS（一种阴离子型表面活性剂）将蛋白质变性，并赋予其均一的负电荷。与SDS结合后，蛋白质的内源性电荷被掩盖，且其空间构象被扭曲，主要以线性形式存在。这样，蛋白质在电泳过程中仅根据分子大小在凝胶中迁移，而非基于形状或电荷的差异。

二、通过SDS-PAGE测定分子量的实验步骤

1.样品制备：

在样品缓冲液中加入SDS和还原剂（如β-巯基乙醇或DTT），在高温（通常为95°C）环境下处理蛋白质样品。此步骤旨在破坏二硫键并使蛋白质完全变性。

2.凝胶制备：

根据目标蛋白质的大小，选择合适浓度的聚丙烯酰胺胶。一般来说，分子量较大的蛋白质选择低凝胶浓度，而小分子量的蛋白质则选择高凝胶浓度以提高分辨率。

3.电泳过程：

将样品加载到预制的凝胶孔中，施加电场。蛋白质在电场的作用下，向阳极方向迁移，基于分子大小进行分离。

4.染色与脱色：

电泳结束后，通过考马斯亮蓝或银染等方法进行凝胶染色，以便观察蛋白质条带。染色后进行脱色处理，去除背景杂质，仅保留蛋白质条带。

5.分子量估算：

通过与分子量标准蛋白进行对比，确定目标蛋白质的迁移距离，并通过已知标准曲线（分子量对迁移距离）推算出其分子量。

三、优势与应用

通过SDS-PAGE测定分子量的优势在于其简单、快速和高效。尤其在蛋白质组学研究中，此技术可广泛应用于蛋白质纯化、鉴定以及分析蛋白质复合物的组成。此外，该方法也适用于检测蛋白质的翻译后修饰情况，如磷酸化或糖基化等，因为这些修饰通常会影响蛋白质的迁移行为。

四、局限性

尽管SDS-PAGE是一种有效的分子量分析技术，但也存在一定局限。首先，该技术仅能提供蛋白质的一维信息，无法区分同分子量但不同电荷或形状的蛋白质。此外，高分子量的蛋白质可能因聚丙烯酰胺胶的分辨率限制而无法准确分离。复杂样品的解析也可能因蛋白质表达量差异而受到影响。

通过SDS-PAGE测定分子量的技术方法通过合理的优化和结合其他分析技术，如质谱和Western blotting，能够有效弥补不足，为深入理解蛋白质的结构与功能提供重要信息。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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