通过SDS-PAGE确定分子量（Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）是蛋白质研究中常用的分析方法之一。该技术利用蛋白质分子的电泳特性，通过在聚丙烯酰胺凝胶中分离蛋白质，最终实现对目标蛋白质相对分子量的估算。这一过程基于蛋白质经SDS处理后丧失天然构象，仅以线性形式存在，使分子量成为决定迁移速度的主要因素。

SDS-PAGE的核心原理是，SDS是一种阴离子型去污剂，能够有效地结合到蛋白质上，赋予其均一的负电荷，从而使蛋白质在电场中按分子量大小分离。聚丙烯酰胺凝胶的孔径决定了其可以分离不同大小蛋白质的能力。在电场作用下，蛋白质在凝胶中迁移的速度基本只与其大小相关，而不受形状或原有电荷的影响。因此，通过在凝胶中检测蛋白质的位置，可以推断其分子量。

一、通过SDS-PAGE确定分子量的操作步骤

1.样品制备

将待分析的蛋白质样品与SDS和还原剂（如β-巯基乙醇）混合，加热处理以确保蛋白质充分变性并获得一致的负电荷分布。

2.凝胶制备

根据目标蛋白质的分子量范围，选择合适浓度的聚丙烯酰胺凝胶。通常不同孔径大小的凝胶可以用于区分不同大小范围的蛋白质。

3.加样与电泳

将处理过的蛋白质样品加入上样孔中，施加电场，蛋白质在电场作用下从负极向正极迁移。小分子量的蛋白质迁移速度较快，而大分子量的则较慢。

4.染色与显影

电泳完成后，对凝胶进行染色（如考马斯亮蓝染色）以使蛋白质条带可视化。脱色处理后，背景变透明，蛋白质条带清晰可见。

5.结果分析

通过与已知分子量的标准蛋白质进行比较，测量样品蛋白质的迁移距离，从而估算其分子量。

二、应用与局限

通过SDS-PAGE确定分子量为各种生物科学研究提供了基础数据支持，可用于蛋白质纯度检测、新蛋白质的分子量鉴定以及蛋白质复合物的组成分析等。但该技术也存在一些限制，特别是对极小或极大的蛋白质分子，结果可能不够精确。此外，某些蛋白质可能与SDS结合不完全或者在SDS-PAGE条件下不能完全解离，导致分子量估算偏差。因此，在进行分子量确定时，结合其他分析方法以验证结果是十分必要的。

通过SDS-PAGE确定分子量由于其简单、快速和相对便宜的特点，成为蛋白质研究实验室的标准工具。尽管有一些局限性，但在大多数应用场景下，SDS-PAGE仍然是可靠和有效的分析手段。通过精确设计实验条件并合理解读结果，研究人员可以在蛋白质分子量的测定中获得有价值的信息。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

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北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

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