Anti-Flag 磁珠

MCE 国际站：Anti-Flag Magnetic Beads

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-K0207

中文名称：Anti-Flag 磁珠

存储条件：4°C，2年请勿离心、干燥或冷冻磁珠。

产品活性：Anti-Flag 磁珠可用于细菌和哺乳动物细胞裂解物以及体外表达系统中 Flag 标记蛋白的免疫沉淀（IP）实验，也可用于免疫共沉淀 (Co-IP) 和小量的蛋白质纯化实验。

生物活性：Anti-Flag 磁珠由高质量的鼠源 IgG1 单克隆抗体与氨基磁珠共价偶联制备，可识别 Flag 标签 (DYKDDDDK) 重组蛋白。 1. 免疫沉淀时只需少量磁珠。 2. 方便省时。 3. 非特异性结合率低。 4. 样品损失少。 5. 蛋白质结合能力高达 0.6 mg/mL。 6. 稳定。

操作流程：1. 抗原样品制备根据不同的样品选择合适的处理方法2. 磁珠预处理混悬 Anti-Flag 磁珠，取 10 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬，置于磁力架上磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 2 次。3. 样品的结合在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 细胞裂解液，充分混悬，置于翻转混合仪孵育，室温孵育 2 小时或者 4℃ 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离，弃上清。注：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。4. 洗涤在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 洗涤缓冲液，充分混悬磁珠，磁性分离，弃上清。重复以上洗涤步骤 3 次，直到洗涤后的上清液中 OD280 小于0.05 为止。注：如上清液的 OD280 大于 0.05，适当增加洗涤次数即可。5. 洗脱本说明书提供三种 Flag 标签蛋白洗脱方案，操作者可以根据后期检测的需要选择不同的洗脱方案。1) 变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 50 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，95°C 加热 5 分钟。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，进行 SDS-PAGE 检测。2) 酸性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 50 μL 的洗脱缓冲液 A (0.15 M Glycine, pH 2.5-3.1) 混合均匀，室温孵育 10 分钟。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，按每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液 (1 M Tris-HCl, pH 8.0)，将洗脱产物 pH 调节至中性，样品用于后期功能分析。3) 竞争性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步骤：分离磁珠，弃上清，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液 B (1 mg/mL 3× Flag peptide, 50 mM Tris, 0.15 M NaCl, pH 7.4)混合均匀，室温孵育 1 小时或者 4°C 条件下孵育 1-2 小时。分离磁珠，收集上清至新的 EP 管，即为目的蛋白，样品用于后期功能分析。

品牌介绍:
•   MCE (MedChemExpress) 拥有200 多种全球独家化合物库，我们致力于为全球科研客户提供前沿最全的高品质小分子活性化合物；
•   50,000 多种高选择性抑制剂、激动剂涉及各热门信号通路及疾病领域；
•   产品种类涵盖各种重组蛋白，多肽，常用试剂盒，更有 PROTAC、ADC 等特色产品，广泛应用于新药研发、生命科学等科研项目；
•   提供虚拟筛选，离子通道筛选，代谢组学分析检测分析，药物筛选等专业技术服务；
•   设有专业的实验中心和严格的质控、验证体系；
•   提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告，确保产品的高纯度、高品质；
•   产品的生物活性多经各国客户实验验证；
•   Nature, Cell, Science 等多种顶级期刊及制药专利收录了MCE客户的科研成果；
•   专业团队跟踪最新的制药及生命科学研究进展，为您提供全球最新的活性化合物；
•   与世界各大制药公司及知名科研机构建立了长期的合作。