使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测大鼠核因子κB受体活化因子配基（RANKL），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中核因子κB受体活化因子配基（RANKL）测定。
工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中大鼠核因子κB受体活化因子配基（RANKL）水平。向预先包被了大鼠核因子κB受体活化因子配基（RANKL）单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠核因子κB受体活化因子配基（RANKL），温育；温育后，加入生物素标记的抗核因子κB受体活化因子配基（RANKL）抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠核因子κB受体活化因子配基（RANKL）的浓度呈正相关。
试剂盒组成
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 |
|
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） |
|
密封袋 | 1个 | 1个 |
|
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品960 pmol/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
链霉亲和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
生物素标记的抗RANKL抗体 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
需要而未提供的试剂和器材
1． 37℃恒温箱
2． 标准规格酶标仪
3． 精密移液器及一次性吸头
4． 蒸馏水
5． 一次性试管
6． 吸水纸
注意事项
1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差
3． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
4． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
6． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
2.自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作程序
1. 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)
480 pmol/L | 5号标准品 | 120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液 |
240 pmol/L | 4号标准品 | 120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液 |
120 pmol/L | 3号标准品 | 120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液 |
60 pmol/L | 2号标准品 | 120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液 |
30 pmol/L | 1号标准品 | 120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液 |
2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗RANKL抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）代测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗RANKL抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
7. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
操作程序总结：
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
检测范围：
检测范围：20 pmol/L -500 pmol/L
保存条件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6个月(2-8℃)。