Kinase-Lumi™超强型化学发光法激酶活性检测试剂盒-产品资讯-资讯-生物在线

Kinase-Lumi™超强型化学发光法激酶活性检测试剂盒

作者:上海雅吉生物科技有限公司 2020-11-03T09:45 (访问量:1863)

Kinase-Lumi™超强型化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Max Luminescent Kinase Assay Kit),是一种通过化学发光法测定激酶反应后溶液中ATP的剩余量(最高可达200μM)来定量检测激酶活性的试剂盒。本试剂盒也可用于检测任何消耗ATP的酶,例如ATPase。

本试剂盒可以检测反应体系中浓度高达200μM的ATP,并在0-200μM范围内有良好的线性关系。对于更低浓度的ATP可以选购检测浓度上限为10μM的Kinase-Lumi化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Luminescent Kinase Assay Kit)或上限为50μM的Kinase-Lumi™增强型化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Plus Luminescent Kinase Assay Kit)。另外两个试剂盒分别在0-10μM和0-50μM范围内有良好的线性关系。对于更高浓度的ATP需要适当稀释后再进行检测。
本试剂盒应用范围广,适用于各类消耗ATP的激酶,包括以蛋白或多肽为底物的蛋白激酶和以糖、脂、醇等为底物的非蛋白激酶。本试剂盒也同样适用于检测消耗ATP的ATPase。
本试剂盒的检测激酶活性的原理参考图1。激酶在反应过程中催化ATP上的磷酸基团转移到底物的羟基上,从而使ATP转变为ADP,这样就可以根据ATP的减少量来定量激酶的活性。借助ATP依赖的萤光素酶(也称荧光素酶)催化的萤光素发光反应,ATP可以通过测定化学发光来进行定量。这样就可以通过设置ATP的标准曲线,来定量激酶反应体系中的ATP剩余量,从而计算出ATP的消耗量,最终计算出激酶的活性。激酶的活性和ATP的剩余量成反比,即激酶活性越高,ATP剩余量越少,发光值越低;反之,激酶活性越低,ATP剩余量越多,发光值越高。

图1. 本试剂盒检测激酶活性的原理图。

本试剂盒的使用非常便捷,对于待测样品仅需加入等体积的检测试剂即可完成检测反应,并且检测反应可以仅在一个孔内完成。本试剂盒不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量筛选(high-throughput screening)检测。
本试剂盒不仅操作特别方便,并且由于使用了热稳定的萤火虫萤光素酶并对反应体系进行了优化,检测体系的发光信号也非常稳定。加入检测试剂后10分钟即可产生非常稳定的化学发光,30分钟内化学发光的下降通常不会超过10%。
对于96孔板,我们推荐使用50μl激酶反应体系和50μl的检测试剂,总体积为100μl,此时本试剂盒可以进行200或2000次检测。对于384孔板,我们推荐使用10μl激酶反应体系和10μl的检测试剂,总体积为20μl,此时本试剂盒可以进行1000或10000次检测。也可以用其它体积,但激酶反应体积和检测试剂体积的比例必须为1:1。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
S0158S-1 Kinase-Lumi™超强型化学发光法激酶活性检测试剂 10ml
S0158S-2 0.5mM ATP 0.2ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,半年有效。-80保存,一年有效。检测试剂需避光保存。
注意事项:
本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。为取得较好的使用效果,第一次解冻后可适当分装,且分装后的检测试剂冻融次数不宜超过3次。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。
建议激酶或ATPase的反应尽量在室温(约25)进行,如果不是在室温进行,需把样品平衡至室温才能用本试剂盒检测。
试剂盒中提供的ATP仅足够用于标准曲线的检测,用于激酶反应的ATP需自备。
检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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